细胞培养基的灭菌方法：确保无菌环境的关键步骤

本文全面解析细胞培养基灭菌方法，包括高压蒸汽灭菌和过滤灭菌的操作要点与注意事项。华晨阳提供即用型无菌培养基，免费试用装限时领取！

一、细胞培养基灭菌的重要性

细胞培养基灭菌方法是细胞培养实验的基础环节，直接影响细胞生长和实验结果的可信度。未灭菌的培养基可能导致微生物污染（如细菌、真菌），造成细胞死亡或数据偏差（*华晨阳内部验证报告2024-Q3*）。

灭菌目标：
✅ 完全灭活微生物：包括细菌、真菌、支原体；
✅ 保留营养成分：避免高温或化学物质破坏培养基成分。

二、高压蒸汽灭菌：原理与操作步骤

原理

高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）通过121℃、15–20分钟的高温高压条件，破坏微生物蛋白质结构，实现彻底灭菌。

操作步骤

1. 分装：培养基分装至耐高温玻璃瓶（≤2/3体积）；
2. 灭菌：121℃、15–20分钟（液体程序）；
3. 冷却：自然降压后取出，避免骤冷导致瓶裂。

⚠️ 注意：含葡萄糖或维生素的培养基可能因高温分解，建议改用过滤灭菌。

三、过滤灭菌：原理与操作步骤

原理

过滤灭菌利用0.22 μm微孔滤膜物理截留微生物，适用于热敏感成分（如生长因子、抗生素）。

操作步骤

1. 组装滤器：无菌连接滤膜、滤杯和接收瓶；
2. 过滤：正压或负压过滤（流速≤5 mL/min）；
3. 分装：无菌条件下分装至预灭菌容器。

📌 华晨阳建议：过滤前用缓冲液（如PBS）润洗滤膜，减少蛋白吸附损失。

其他灭菌方法概述

四、灭菌后的保存与注意事项

保存条件

• 温度：2–8℃避光保存（过滤灭菌培养基）；
• 期限：高压灭菌培养基建议7天内使用，过滤灭菌可延长至4周。

质量控制

• 无菌测试：37℃培养48小时，观察浑浊度；
• pH检测：保持在7.2–7.4范围内。

常见问题与解决方案

问题1：高压灭菌后培养基沉淀怎么办？

• 原因：磷酸盐或钙镁离子高温析出；
• 解决：过滤去除沉淀或调整配方（如改用HEPES缓冲）。

问题2：过滤灭菌效率低如何优化？

• 建议方案：选择低蛋白结合率滤膜（如PVDF材质），预过滤（0.45 μm）减少堵塞。

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