细胞污染零容忍！RPMI-1640 培养基无菌处理与使用技巧

在细胞培养过程中，RPMI-1640培养基的无菌状态是实验成功的生命线。一旦发生细胞污染，不仅导致实验失败，更可能影响整个研究体系的可靠性。掌握规范的无菌处理方法与关键的使用注意事项，是每一位研究者的必备技能。助您系统规避污染风险。

污染源谱：细菌、真菌、支原体、化学颗粒

识别常见的污染源是有效预防的第一步。

• 细菌污染
  • 种类：包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
  • 风险与现象：繁殖迅速，通常在24小时内导致培养基浑浊，并因代谢产酸引起pH值下降（酚红变黄）。
• 真菌污染
  • 种类：如白色念珠菌或各种霉菌。
  • 风险与现象：形成肉眼可见的丝状或絮状菌落，漂浮于培养基中或附着于容器壁。
• 支原体污染
  • 特点：肉眼不可见，不引起培养基明显浑浊。
  • 风险与现象：长期潜伏，影响细胞各项功能，需通过PCR检测才能确诊。
• 化学污染
  • 来源：主要为内毒素。
  • 风险与现象：当内毒素 > 0.25 EU/mL时，可能引起细胞圆缩、生长抑制等应激反应。

无菌处理：从分装到使用的6道关

构建一个完整的无菌操作链条，是杜绝污染的核心。

1. 环境：所有操作必须在百级洁净台中进行，并定期监测，确保台面沉降菌<1 CFU/皿。
2. 包装与过滤：若自行配制，需经过0.1 μm滤膜过滤，并弃去前10 mL滤液以冲洗滤膜。
3. 分装：将培养基分装至无菌的50 mL离心管中，预留10%顶空，避免温度变化时液体溢出。
4. 储存：分装后立即置于 4 ℃避光保存，禁止在室温下放置超过2小时。
5. 取用：取用前，用75%酒精擦拭瓶口，并在火焰上快速过火3秒以灭菌。
6. 丢弃：对于已开启但暂不使用的剩余培养基，应在24小时内进行高压灭菌后丢弃。

污染检测：快速判定“报警信号”

建立快速检测流程，便于早期发现和处置污染。

预防策略：实验室SOP+个人习惯

系统性预防远胜于事后处理。

• 周清洁：每周用75%酒精擦拭洁净台、培养箱内壁及水盘。
• 月监测：每月进行一次沉降菌和支原体抽检，并详细记录所有耗材的批次号，便于溯源。
• 季更换：每季度更换培养箱的HEPA滤芯，并在水盘中添加专用的消毒液。

→ 华晨阳建立了严格的留样制度：每批RPMI-1640产品均留样50 mL，保存至有效期后6个月。若用户在有效期内对产品质量存疑，可申请溯源复核，这体现了其对无菌方案的承诺。

华晨阳无菌保障亮点

在无菌方案与检测数据方面，华晨阳产品通过以下设计提供多重保障：

• 初级防护：采用三层铝箔袋包装，并设有清晰的无菌持拿区标识，指导用户正确开封，避免触碰污染。
• 终端灭菌：生产过程结合0.1 μm过滤与γ辐照，灭菌保证水平（SAL）达 10⁻⁶，提供双重保障。
• 质量透明化：完善的批号追溯系统，用户扫码即可下载该批次详细的无菌、内毒素、支原体检测报告。

常见问题解答

Q1：一旦发现细胞培养被污染，正确的处理流程是什么？
→ 立即将污染培养物隔离，并尽快通过PCR等方法鉴定污染源。随后，需要对涉及的环境（如洁净台、培养箱）进行全面彻底的消毒，并复查所有操作流程。

Q2：培养基经过滤除菌后，能否再进行高压灭菌以增加保险？
→ 绝对禁止。 高压灭菌会破坏培养基中的热不稳定营养成分（如维生素、某些氨基酸），导致培养基失效。

Q3：培养基开瓶后，建议在多长时间内用完？
→ 建议在开瓶后4周内用完。为保险起见，建议每周对正在使用的培养基进行无菌抽检，确保其无菌状态。

重要提示：本品仅供科研使用，不可用于临床诊断或治疗。